Tim-3对NLRP3炎性小必威官方网站- Betway APP下载- 2026世界杯指定体育平台体的调控作用及其机制研究pdf

2026-03-02 02:23:35　　点击量：

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　　背景近年来，多种自身免疫性疾病及炎症性疾病如类风湿性关节炎、痛风、Ⅰ型糖尿病、胰腺炎、腹膜炎等发病率逐年升高，对人们生命健康造成了极大的威胁。研究表明，在多种自身免疫性疾病以及炎症性疾病的发病过程中存在NOD样受体蛋白3（NODLIKERECEPTOR,PYRINDOMAINCONTAINING3，NLRP3）炎症小体的过度活化引起的炎症因子白细胞介素1BETA（INTELEUKINE1BETA，IL1Β）大量释放，进而引起剧烈的炎症反应。所以，探索机体中NLRP3炎症小体的调控机制及寻找其负性调控分子成为了科研工作者迫切要解决的课题。目前研究认为，NLRP3炎症小体的活化需要两个信号预激信号（第一信号）和激活信号（第二信号），其中第一信号主要负责NLRP3炎性小体复合体组分和效应分子的转录表达，第二信号则是将NLRP3炎性小体各组分由各自独立状态组合成复合体，同时激活NLRP3炎性小体，处于活化状态的NLRP3炎性小体可以促进炎症因子IL1Β、IL18的成熟与释放，从而引起机体的炎症反应和特定条件下疾病的发生。T细胞免疫球蛋白及粘蛋白3（TCELLIGMUCIN3，TIM3）是一新的具有抑制活性的免疫检查点分子。TIM3在T细胞上的异常表达与多种免疫相关性疾病如肿瘤、病毒感染等相关，因此被认为是新一代的免疫调控靶点。近年来，TIM3在天然免疫细胞上的表达及功能越来越受到人们的重视，然而TIM3调控天然免疫的机制尚不十分清楚。作为天然免疫效应成分的炎症小体是否也受到TIM3调控是非常值得探讨的课题。我们实验室在前期研究中发现TIM3能够通过抑制TLR4参与调控炎症反应。鉴于TLR4在NLRP3炎性小体的活化过程中也发挥着重要的作用，那么TIM3分子是否也参与调控NLRP3炎症小体的活化其参与调控的机制是什么这将是本课题研究的主要内容。目的探讨TIM3对NLRP3炎症小体的调控作用及其机制。方法⑴TIM3对NLRP3炎性小体活化作用的探讨。从TIM3高表达的转基因小鼠（TIM3TG）和野生型小鼠WT中分离出腹腔巨噬细胞，使用NLRP3炎性小体活化的第一信号激活剂LPS和第二信号激活剂ATP进行刺激，观察巨噬细胞中NLRP3炎性小体的活化情况。使用TIM3融合蛋白（TIM3IG）阻断鼠源巨噬细胞系RAW2647中TIM3信号通路，观察NLRP3炎性小体的活化情况；⑵TIM3调控NLRP3炎性小体的机制探讨对复合物成分转录及表达的影响。使用TIM3IG阻断TIM3信号通路，观察鼠源巨噬细胞系RAW2647以及J774A1在NFΚB抑制剂存在和不存在的条件下NLRP3及IL1Β在MRNA和蛋白水平的表达情况。使用LPS刺激TIM3TG和WT小鼠腹腔巨噬细胞，观察NLRP3和IL1Β在MRNA和蛋白水平的表达情况；⑶TIM3调控NLRP3炎性小体的机制探讨对复合物成分组装及活性的影响。使用TIM3IG阻断TIM3信号通路，观察RAW2647细胞中ATP释放、K外流和ROS的产生情况，并观察在K外流和ROS的产生受到抑制的情况下NLRP3炎性小体的活化情况；⑷TIM3调控NLRP3炎性小体的分子机制探讨。构建TIM3分子256/263位点酪氨酸双突变体，观察这两个位点突变后TIM3对NLRP3炎性小体的表达和活化的影响情况；⑸TIM3与腹膜炎患者中NLRP3炎性小体表达的关系研究。收集并检测临床腹膜炎患者血清中可溶性TIM3蛋白的表达情况，并观察人源巨噬细胞系THP1和U937在TIM3信号通路阻断的情况下NLRP3和IL1ΒMRNA的表达情况；⑹TIM3信号对小鼠腹膜炎进程的影响。构建小鼠腹膜炎模型，观察在TIM3高表达和阻断TIM3信号通路后小鼠腹膜炎的炎症反应程度以及体内NLRP3炎症小体活化情况。结果①和WT组相比，TIM3TG组小鼠腹腔巨噬细胞中LPS和ATP诱导的NLRP3炎性小体的活化受到了抑制，表现为CASPASE1活性的抑制以及IL1分泌的显著降低。而用TIM3IG阻断TIM3信号通路后，NLRP3炎性小体的活性被激活；②TIM3IG阻断TIM3信号通路后，NFΚB活性增加，NLRP3和IL1Β在MRNA和蛋白水平表达升高，当NFΚB受到抑制后，NLRP3和IL1Β表达也受到了抑制；③TIM3IG阻断TIM3通路后，ATP的释放、K外流和ROS的产生增加，IL1Β释放增强，当K外流和ROS的产生受到抑制后，IL1Β释放也受到了抑制；④当TIM3分子256/263酪氨酸位点双突变后，TIM3对NLRP3炎性小体抑制作用减弱；⑤临床腹膜炎患者血清中可溶性TIM3蛋白（STIM3）含量高于正常人。人源巨噬细胞系U937和THP1TIM3信号通路被阻断后，NLRP3和IL1Β在MRNA水平的表达升高；⑥在构建的小鼠腹膜炎中，TIM3TG组腹膜炎炎症反应程度明显低于WT组，TIM3信号通路阻断组腹膜炎炎症反应程度明显高于对照组。结论⑴TIM3通过抑制NLRP3炎性小体活化的第一信号和第二信号参与NLRP3炎性小体的负性调控。⑵TIM3胞内段256/263位点的酪氨酸在其对NLRP3炎性小体的调控过程中发挥着重要的作用。⑶TIM3能够通过负性调控NLRP3炎性小体对腹膜炎发挥保护作用。